我要投搞

标签云

收藏小站

爱尚经典语录、名言、句子、散文、日志、唯美图片

当前位置:主页 > 金桥乡 >

12Y005 01 Fos单克隆抗体北京中杉金桥生物技术有限公司 批号 F22

归档日期:06-17       文本归类:金桥乡      文章编辑:爱尚语录

  AYOU短视频学问进修者社区

  2020年权势巨子考研专业课材料

  餐饮行业阐发及策略演讲

  微信搜豆丁共读,读书赢赏金

  IT计较机

  建筑/情况

  法令/法学

  通信/电子

  研究生测验

  经济/商业/财会

  幼儿/小学教育

  办理/人力资本

  汽车/机械/制造

  医学/心理学

  资历/认证测验

  金融/证券

  文学/艺术/军事/汗青

  论文

  办理论文

  12Y005 01 Fos单克隆抗体北京中杉金桥生物手艺无限公司 批号 F2209 山羊抗SP单克隆抗体 Santa Cruz Biotechnology Inc 批号 E2506 PV9003山羊超敏二步法免疫组化检测试剂盒 北京中杉金桥生物手艺无限公司 批号 K92413A 包罗 试剂1 聚合物

  在本页浏览全文

  11-20页

  21-30页

  41-51页

  12Y005 01 Fos单克隆抗体北京中杉金桥生物手艺无限公司 批号 F2209 山羊抗SP单克隆抗体 Santa Cruz Biotechnology Inc 批号 E2506 PV9003山羊超敏二步法免疫组化检测试剂盒 北京中杉金桥生物手艺无限公司 批号 K92413A 包罗 试剂1 聚合物辅助剂 试剂2 辣根酶标识表记标帜抗山羊IgG多聚体 H2O2去离子水、液体DAB显色剂其他 、PBS液、4 多聚甲醛的0 1mol L磷酸缓冲液、甲醛、二甲苯、无水乙醇、枸橼酸钠抗原修复液 以上均为国产阐发纯试剂 、多聚赖氨酸玻片。 幼鼠结直肠扩张气囊幼鼠结直肠扩张气囊 以下简称气囊 便宜。制备方式 由输液导管插入6号乳胶指套制成 长度4 0cm 导管与指套毗连处用丝线双重结扎 确保密封不漏气。导管通过三通管一端与血压计相连 一端毗连橡皮加压球 气囊在尝试前应充气留宿。 尝试方式尝试流程见图1。 1幼鼠慢性内脏痛觉敏化模子制备参照Al chaer报道的方式 12 本研究室张睿等 13 连系儿童FGIDs的春秋特征和幼鼠心理、剖解特点 成立幼鼠内脏痛觉敏化模子。具体步调如下 重生鼠在出生后8d 重生大鼠 出生后第8d起头 纯真气囊插入 无扩张 14d结直肠扩张CI 刺激 14d雷莫司琼心理盐水雷莫司琼A1B2组A1B1组A2B2组A2B1组 心理盐水 AWR评分、痛阈测定和腹外斜肌放电、 15 21d 干涉研究 分组成果 6周龄时目标检测 免疫组化检测 P物质及Fos卵白 肠组织病理查抄和肠毁伤评分 处死动物 留取脊髓组织 固定 13 14d 每天半夜 14 30 15 30 接管一次CI刺激。CI刺激采用20mm 5mm人血管重建气囊将气囊全数插入幼鼠结直肠中 充气扩张发生60mmHg压力 血压计测定 压力维持lmin后排出空气再抽出气囊 随后 常规豢养至6周龄。 1腹腔打针雷莫司琼本尝试中的雷莫司琼为针剂故采用腹腔打针 国外在成鼠的相关研究中 Hirata 14研究表白30μg kg的雷莫司琼经口给药能够使成年大鼠内脏感触感染阈值降低 因为腹腔打针给药路子生物利费用较经口给药高 腹腔打针剂量约为经口给药剂量的1 故可得出每天每kg体重所赐与的剂量是1015μg范畴 因而 本研究中 每天幼鼠所给药物的剂量拔取为12g kg。 A1B1、A2B1组乳鼠在重生期CI后晚期 第15 21d 赐与腹腔打针雷莫司琼 剂量12g kg 8ml kg 1ml含15g插手9 9ml心理盐水稀释为1 每天给药前称量体重按照幼鼠每天现实的体重 得出每天所给的雷莫司琼剂量 右手持打针器 左手的小指和无名指抓住重生鼠的尾巴 别的三个手指抓住小鼠的颈部 使重生鼠的头部向下 从重生鼠腹部的右下象限进针 打针雷莫司琼。 打针心理盐水对照组不赐与雷莫司琼腹腔打针 仅赐与不异量 体积 心理盐水腹腔打针作为对照。故A1B2、A2B2组每天打针前称体重 按照体重获适当天腹腔打针心理盐水。右手持打针器 左手的小指和无名指抓住重生鼠的尾巴 别的三个手指抓住小鼠的颈部 使重生鼠的头部向下 从重生鼠腹部的右下象限进针 打针心理盐水8ml kg。 3幼鼠内脏痛敏感性评价A1B1、A2B1、A1B2、A2B2组大鼠6周龄时进行结直肠扩张刺激下内脏敏感性评价。我们在参照国外文献报道的方式根本上 连系国内的现实环境和幼鼠剖解心理特点 成立了行为学评价连系电心理评价的幼鼠内脏痛敏感性评价方式。采用AWR评分 15 16测定和腹外斜肌放电作为分歧的扩张压力下结直肠痛苦悲伤反映目标 评估结肠痛觉敏感性。 1痛阈测定幼鼠6周龄时通过测定压力阈值来反映内脏痛阈。 具体测定方式 CRD导管结尾系长4cm的柔嫩乳胶指套制成气囊 尝试前扩张充气24h。麻醉后 将涂白腊油的气囊插入幼鼠结直肠内 负气囊结尾深切肛门内 14 0cm在肛门外1 0cm处用胶布将导管固定在大鼠尾根部。将大鼠放入20cm 6cm 8cm的无机玻璃察看箱 顺应30min后起头尝试。直肠扩张导管尾端以三通管接血压计及打针器 持续、迟缓注气使压力上升 压力每次递增5mmHg 连结3min 1min后反复加压直至肉眼察看呈现较着的下腹壁抬离箱底或较着收缩变平 AWR评分为3分 时的最小压力值为痛阈 16 扩张压力范畴0 80mmHg。 2腹壁撤离反射AWR 评分 按照大鼠AWR的强度进行评分 评分尺度为 15 结肠扩张时腹部肌肉起头收缩但腹肌未抬离箱底 结肠扩张时腹壁拱起或伴身体、骨盆躬起。每个CRD压力进行3次AWR评分取均值。 3腹外斜肌放电波幅值测定尝试情况要求恬静 室温维持在24 26 范畴之内。通过分歧压力下CRD惹起腹外斜肌放电添加的方式 来评价内脏痛觉敏化 13 17 。用上述方式插入气囊 双极电极固定于大鼠腹外斜肌上 用RM6240多道生物信号采集处置系统记实大鼠腹外斜肌放电勾当。大鼠清醒后顺应30分钟后 记实其腹外斜肌根本放电。通过导管对大鼠结直肠予以加压 压力别离为15mmHg 30mmHg 45mmHg 60mmHg 75mmHg从低到高 每个压力持续10s 间隔4min记实其腹外斜肌放电。各压力腹外斜肌放电记实各压力下的腹外斜肌放电幅值为腹外斜肌放电幅值减去其根本放电幅值。 4结肠组织的病理学查抄尝试竣事后 取6周龄幼鼠距肛门10cm处降结肠 用10 福尔马林固定 顺次酒精脱水 二甲苯通明 白腊包埋 取冠状切面 HE染色后由病理科大夫在光镜下察看结肠组织形态学改变。按照结肠组织固有层中性粒细胞浸湿程度和间质水肿程度分为轻、中、重度炎症 来察看各组结肠粘膜能否具有病理差别。 1脊髓切片制备幼鼠在麻醉下表露胸腔 经左心室插管 先快速灌入插手肝素钠的心理盐水冲去血液 多聚甲醛的01mol L磷酸缓冲液 PBS pH7 500ml注毕当即留取脊髓腰骶段 L6 S2 置于4 甲醛溶液中浸泡 固定4h再换入70 乙醇溶液中脱水保留。腰骶段脊髓标本常规白腊包埋 冠状切片 置于多聚赖氨酸处15 理的载玻片上 60 温箱烤片留宿使切片慎密粘附。 Fos卵白和P物质表达免疫组织化学染色使用SABC免疫组织化学法对脊髓切片别离进行Fos卵白染色 具体步调如下 压力锅抗原修复PBS洗涤 2min H2O2室温孵育510min以消弭内源性过氧化物酶的活性 蒸馏水冲刷PBS浸泡5min 滴加兔抗Fos抗体北京博奥森无限公司 留宿或37孵育1 2小时 PBS冲刷 5min 滴加生物素标识表记标帜的羊抗兔IgGPBS稀释 北京中山金桥生物手艺无限公司 37 孵育30 60min 滴加SABC北京中杉金桥生物手艺无限公司 室温20min PBS冲刷 5分钟 显色、冲刷复染 封片。用PBS液取代一抗作为阳性对照 使用山羊超敏二步法对脊髓切片进行SP染色 具体步调如下 将15003000ml的枸橼酸钠抗原修复液注入不锈钢压力锅中加热至沸腾 切片置于金属架上放入锅内 使切片位于液面下 盖锅盖加上排气阀 喷气后起头计时高压修复2min 打开锅盖 取出切片 蒸馏水洗后 PBS洗涤 2min PBS冲刷2min 75稀释 37 孵育2h PBS冲刷 5min 滴加试剂137 孵育20分钟 PBS冲刷 2min 滴加试剂237 孵育20分钟 PBS冲刷 2min DAB显色剂显色北京中杉金桥生物手艺无限公司 自来水充实冲刷复染 封片。 所有免疫组化反映均设阳性对照 用PBS液取代一抗 其余步调同上。 计较机图像阐发CX31R7SF型数码显微镜摄像系统 日本Olympus 对每张脊髓切片进行图像采集 放大倍数为40倍 像素4080 3072 。在不异倍数下 每张切片随机拔取3个视野 计数3 16 个视野 使用计较机图像阐发系统 Image Pro Plus USA对Fos卵白和SP阳性细胞积分光密度 integrated optical density IOD 进行半定量阐发 IOD是指阳性方针所有像素点光密度值之和 能够反映方针中总的表达强度 因而 积分光密度反映了颜色深浅 也反映了阳性面积大小 18 统计学阐发数据计较以均数 尺度差 暗示。以0mmHg压力下的腹外斜肌放电为根本放电为消弭根本放电分歧对成果的影响 将每只幼鼠在15mmHg、30mmHg、45mmHg、60mmHg、75mmHg CRD压力下腹外斜肌放电幅值减去其根本放电幅值 其差值代表各个分歧CRD压力下腹外斜肌放电幅值。采用协方差阐发各要素的结果 对于4组幼鼠脊髓背角Fos卵白和SP表达的IOD值采用析因设想的方差阐发。α 05为显著性查验尺度统计阐发采用SPSS13 0统计学软件进行。 痛阈测定成果A1B1组、A1B2组、A2B1组和A2B2组幼鼠痛阈检测成果见表1和表2。从表1和表2可见 幼鼠痛阈遭到能否赐与重生期CI 成立幼鼠内脏痛觉敏化模子和晚期雷莫司琼干涉两要素的影响。在没有晚期雷莫司琼干涉的幼鼠中 成立内脏痛觉敏化模子的零丁效应为 21 46 mmHg 在晚期雷莫司琼干涉的幼鼠中 成立内脏痛觉敏化模子的的零丁效应为 67mmHg在成立内脏痛觉敏化模子幼鼠中 晚期雷莫司琼干涉的零丁效应为18 96mmHg 在对照组幼鼠中 晚期雷莫司琼干涉的零丁效应为 83mmHg。成立内脏痛觉敏化模子的主效应为11 56 即成立内脏痛觉敏化模子可使幼鼠痛阈降低11 56mmHg 001晚期雷莫司琼干涉的主效应为9 06 即晚期雷莫司琼干涉可使幼鼠痛阈增高9 06mmHg 001。成立内脏痛觉敏化模子与晚期雷莫司琼干涉对幼鼠痛阈影响具有有交互感化 3341 4375 86A2B2组 22 29 33A1B2组 33 02 21 46 4292 54A2B1组 41 25 44A1B1组 42 08 67均值 43 33 31 77 11 56 A主效应 零丁效应 8318 96 06B主效应 成立幼鼠内脏痛觉敏化模子1069 61 45 61 000晚期雷莫司琼干涉 656 97 28 02 000成立幼鼠内脏痛觉敏化模子 晚期雷莫司琼干涉 783 49 33 41 000误差 23 45 AWR评分成果重生期CI成立幼鼠内脏痛觉敏化模子和晚期雷莫司琼干涉对幼鼠AWR评分的影响成果见表3和图2。从表3和图2可见 跟着CRD压力升高 各组幼鼠AWR评分逐步添加 重生期CI成立幼鼠内脏痛觉敏化模子可使大鼠AWR评分升高 晚期雷莫司琼干涉则可使大鼠AWR评分降低 在不异CRD压力下 没有晚期雷莫司琼干涉的内脏痛觉敏化模子组幼鼠 A1B1组 AWR评分较着高于其它各组 而晚期雷莫司琼干涉则可使幼鼠AWR评分显著降低 与A2B1组、A2B2组相接近 20mmHg40mmHg 60mmHg 80mmHg A1B1组 28bA1B2组 00A2B1组 33bA2B2组 33538 10 342 29 221 与前一压力比拟aP 05bP 腹外斜肌放电检测成果重生期CI成立幼鼠内脏痛觉敏化模子和晚期雷莫司琼干涉对幼鼠腹外斜肌放电幅值影响成果见表4和图3。从表4和图3可见 随CRD添加 各组幼鼠腹外斜肌放电 19 幅值逐步添加 重生期CI成立幼鼠内脏痛觉敏化模子可使腹外斜肌放电幅值升高 晚期雷莫司琼干涉则可使腹外斜肌放电幅值降低 在不异CRD压力下 没有晚期雷莫司琼干涉的内脏痛觉敏化模子组幼鼠 A1B1组 腹外斜肌放电幅值较着高于其它各组 而晚期雷莫司琼干涉则可使腹外斜肌放电幅值显著降低 与A2B1组、A2B2组相接近 15mmHg30mmHg 45mmHg 60mmHg 75mmHg A1B1组 151312 14a1900 11a22 75 3713 24 35a1826 33a2330 04a27 80 32a1290 88b1847 37b21 76 011217 16a1906 43b22 68 42aF11 521 14 918 与前一压力比拟aP 05bP 各组大鼠腹外斜肌放电波幅值比力20 结肠组织病理查抄研究竣事时四组幼鼠剖解均未见较着的肠腔扩张与四周组织粘连等病理改变。降结肠常规病理切片所示两组降结肠未见较着组织毁伤 组织切片均无中性粒细胞浸湿间质无较着水肿。 二、晚期雷莫司琼干涉对内脏痛觉高敏感幼鼠脊髓背角Fos卵白表达影响 阳性对照组脊髓背角神经元均没有Fos卵白表达 与阳性对拍照比 4组幼鼠两侧脊髓背角神经元均有分歧程度Fos卵白免疫阳性 Fos like Immunore activity FLI 细胞表达。Fos卵白阳性表达表示为 细胞膜或细胞质内呈现深褐色颗粒。见图4、图5。 A1B2组 脊髓背角呈现稠密深褐色免疫阳性产品 染色深 Fos阳性细胞多 A1B1组 脊髓背角内有免疫阳性产品 呈褐色堆积在细胞质 染色浅 Fos阳性细胞少 A2B1组、A2B2组 脊髓背角内仅有少量Fos阳性细胞 免疫阳性产品着色浅淡。 各组幼鼠脊髓背角FLI细胞表达环境免疫组织化学染色 200 21 各组幼鼠脊髓背角FLI细胞表达环境免疫组织化学染色 400 对影响幼鼠腰骶段脊髓背角FLI神经元IOD值的两个要素 能否重生期CI成立幼鼠内脏痛觉敏化模子和能否晚期雷莫司琼干涉进行析因设想的方差阐发 成果见表5。 各组幼鼠脊髓背角FLI细胞IOD值22析因阐发成果 6401 14 33 A2B2组 189 11 34 98 A1B2组 126 56 125 7361 71A2B1组 78 86 10 18 A1B1组 76 23 25均值 68 81 133 98 65 17 A主效应 零丁效应 11025 100 65 B主效应 从表5可见 幼鼠腰骶段脊髓背角FLI神经元IOD值遭到能否重生期CI成立幼鼠内脏

  晚期雷莫司琼干涉对内脏痛高敏感幼鼠脊髓背角fos卵白和p物质表达的影响,雷莫司琼,盐酸雷莫司琼,魔王松鼠幼鼠,脊髓灰质炎,脊髓毁伤,脊髓灰质炎疫苗,脊髓炎,脊髓型颈椎病,脊髓小脑变性症

本文链接:http://ballevart.com/jqx/498/